自酿葡萄酒中甲醇含量测定

一、 实验目的

(一) 依据食品检验工国家职业标准（中.高级）要求，针对甲醇的测定，通过测定葡萄酒中甲醇含量，学习和领会品红-亚硫酸比色法测定甲醇的操作要点及操作条件的选择。

(二) 以甲醇测定学习为主，延伸至学习苯丙锕呵黄曲霉素的测定。

二、 实验原理

甲醇系无色透明。具有高度挥发性的液体，略有酒精味，易于水，醚及大多数有机溶剂混融。其来源为原料和辅料果胶质内甲基酚分解而成。

甲醇进入人体后分解缓慢，有蓄积作用，少量甲醇也容易中毒，一般饮用后数小时即引起昏晕、沉睡、全身无力、头痛、视觉模糊、恶心呕吐、腹痛、呼吸困难，随即譚忘和知觉丧失，数小时至数日后失明。（GB2757-2012）规定以粮谷类为原料的酒，甲醇不得超过0.6g/L，其他配制酒类不得超过2.0g/L。

三、 实验仪器：紫外可见分光光度计

四、 实验试剂：

(1)高锰酸钾一磷酸溶液：称取39高锰酸钾，加入15rnl磷酸(85％)与70ml水的混合液中，溶解后加水至lOOml，贮与棕色瓶内，防止氧化力下降，保存时间不宜过长。

(2)草酸一硫酸溶液：称取59无水草酸(H2C204)或79含2分子结晶水的草酸(H2C204·2H20)，溶与硫酸(1+1)中至lOOml。

(3)品红一亚硫酸溶液：称取0．19碱性品红研细后，分次加入60rnl80℃的水，边加入水边研磨使其溶解，用滴管吸取上层溶液滤于lOOml容量瓶中冷却后加10“亚硫酸钠溶液(100几)，lml盐酸，再加水至刻度，充分混匀，放置过夜，如溶液有颜色，可加少量活性炭搅拌后过滤，贮于棕色瓶中，置暗处保存，溶液显红色时应弃去重新配制。

(4)甲醇标准溶液：称取1．0009甲醇，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10．0mg甲醇，置低温保存。(5)甲醇标准使用液：吸取10．0“甲醇标准溶液置于lOOml容量瓶中，加水稀释至刻度，再取25．Oral稀释液置于50ml容量瓶中，加水至刻度，该溶液每毫升相当于0．50mg甲醇。

(6)无甲醇的乙醇溶液：取0．3rrd按操作方法检查，不应显色，如显色需进行处理，取300ml乙醇(95％)，加高锰酸钾少许，蒸馏，收集馏出液，在馏出液中加入硝酸银溶液(取19硝酸银溶于少量水中)和氢氧化钠溶液(取1．59氢氧化钠溶于少量水中)，摇匀，取上清夜蒸馏，弃去最初50ml馏出液，收集中间馏出液约200ml，用酒精比重计测其浓度，然后加水配成无甲醇的乙醇(体积分数为60％)。

(7)亚硫酸钠溶液(100g／L)。

五、 实验步骤

根据试样中乙醇浓度适当取样(乙醇浓度：30％，取1．0ml；40％，取0．80ml；50％，取0．60ml；60％，取0．50ml)，置于25ml具塞比色管中。着色或浑浊的蒸馏酒和配置酒，应先吸取100ml试样于250ml或500ml全玻璃蒸馏器中，加50rnJ水，再加入玻璃珠数粒，蒸馏，用100ml容量瓶收集馏出液100ml，然后再按上述取样体积取样，吸取0，0．20，0．40，0．60，0．80，1．00ml甲醇标准使用液(相当0，O．10，0．20，0．30，0．40，0．50rag甲醇)分别置于25rnl具塞比色管中，并加入0．5ml无甲醇的乙醇(体积分数为60％)。于试样管及标准管中各加水至5ml，再依次各加2ml高锰酸钾一磷酸溶液，混匀，放置lOmin，各加2ml草酸一硫酸溶液，混匀使之褪色，再各加5ml品红一亚硫酸溶液，混匀，与20℃以上静置0．5h，用2em比色杯，以零管调节零点，于波长590nm处测吸光度，绘制标准曲线比较，或与标准系列目测比较。

3结果计算试样中甲醇的含量按下式进行计算

式中：x一试样中甲醇的含量，单位为克每百毫升(g／100m1)；优一测定试样中甲醇的含量，单位为毫克(mg)；州样体积，单位为毫升(n-a)。计算结果保留两位有效数字精密度：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的：含量≥0．10g／lOOml为≤15％；含量<0．10g／100ml为≤20％。

甲醇含量不得超过520mg/L

六、 意的事项

(1)温度的影响：当试验加入草酸硫酸溶液褪色放出热量，温度升高，此时需适当冷却，才能加入亚硫酸品红溶液，亚硫酸品红显色时，温度最好控制在20℃以上，温度越低，所需显色时间越长。反之，相反，但显色的稳定段也短，另外，标准管和式样管显色温度之差不应超过I'C，因为温度对吸光度有影响。

(2)酸度的影响：试验显色时酸度过低，甲醛和亚硫酸显色就不完全，酸度过高反而会降低显色灵敏度。

(3)草酸一硫酸溶液的浓度影响：在配制该溶液时，所称取的草酸量一定要准确，如果过量，溶液浓度过高，过剩的草酸将品红亚硫酸还原而成红色，反之就不能使溶液褪色。

七、 实验结论

试样中甲醇含量为，是否符合要求

自酿葡萄酒甲醇测定