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发布时间:2023-11-13 22:33:16

生物选修3知识点(区别不同工程和不同操作水平)专题1基因工程概念:按照人们的愿望,进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术,赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。基本原理:让目的基因在受体细胞内稳定且高效的表达理论基础:DNA是生物遗传物质的发现,DNA双螺旋结构,遗传信息传递方式核心:构建重组DNA分子(一)基本工具(技术基础)Cf工具&工具酶1.限制性核酸内切酶1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的(不切割自身DNA的原因:原核生物中无该限制酶的识别序列或其已被修饰)2功能:识别和切割DNA分子内一小段特殊的脱氧核苷酸序列(偶数碱基对回文序列)特异性表现:识别特定片段、切割该片段中的特定位点、形成一种末CfGGATCC&—↓GATC3)结果:DNA片段末端形成末端碱基互补的黏性末端或平末端切割(质粒)②根据目的基因的位置或剪辑序列来确定限制酶的种类③切割后的片段要画全2.DNA连接酶1功能:连接具有末端碱基互补的2DNA片段,形成重组DNA分子CfDNA聚合酶:只能将单个脱氧核苷酸逐个添加到已有的脱氧核苷酸链之后,需模板DNA,连接磷酸二酯键3.载体1条件:①能在受体细胞中稳定保存并大量复制,基本不影响受体细胞正常生命活动②一至多个限制酶酶切位点(必须在所需标记基因外),供外源DNA片段插入③标记基因,便于筛选含有重组DNA分子的受体细胞——往往需要根据需求改造天然载体2功能:①作为运载工具将目的基因转移到受体细胞内——载体选质粒的原因:具有环状结构,能够携带目的基因②利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制和转录/表达3)质粒(最常用的载体)一种能够自主复制,在细菌(或酵母菌中独立于染色体之外存在的双链环状DNA分子4)其它载体:噬菌体、动植物病毒(基因工程的基本操作程序第一步:获取目的基因1.目的基因:人们所需要的编码蛋白质的结构基因2.方法(1序列已知
①化学合成法——较长DNA单链合成过程中容易出现碱基缺失反转录法e.g获取mRNA逆转录成cDNA再用DNA聚合酶生成双链)聚合酶链式反应(PCR扩增PolymeraseChainReaction1原料:水、缓冲液、4种游离脱氧核苷酸、TaqDNA聚合酶、模板DNA(……基因对…基因特异的2DNA引物(防止相互或自身折叠)2)过程:第一步:加热至9095℃,DNA在高温下变性解链第二步:冷却到5560℃,引物结合到互补DNA链(退火)第三步:加热至7075℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成能量来源于dNTP(2序列未知建立基因文库:建立一个包括目的基因在内的基因文库(保存在受体菌中,再从基因文库中获取3.目的基因大量扩增/分子水平的克隆①利用受体细胞(如E.coli)无性繁殖,利用基因探针钓取,再导入最终受体细胞e.g目的基因→大肠杆菌→农杆菌→植物细胞→植物(主要在细菌分裂时几何级扩增,尽管质粒独立于拟核,可在分裂时发生自我复制,但由于多数细菌对胞内质粒数量有限制,故该种复制对扩增效果不大)PCR技术第二步:形成重组DNA分子(基因表达载体:启动子+目的基因+终止子+标记基因)1.目的转运目的基因,并使在受体内稳定存在、复制、表达/转录并稳定遗传(基因型X02.过程:1)单酶切:用同种限制酶分别切割目的基因和载体从而形成相同的粘性末端,然后用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来——有时用不同限制酶也可以形成相同的粘性末端2)双酶切:用两种限制酶切割使目的基因和载体两端各形成两种粘性末端,防止载体和目的基因自身环化第三步:将重组DNA分子导入受体细胞——需将目的基因整合到动植物细胞的染色体DNA目的基因是否整合到染色体DNA上决定于基因表达载体上是否有相关序列(形成酶)1.植物体细胞:农杆菌转化法(插入Ti质粒上的T-DNA),基因枪法、花粉管通道法——导入叶绿体DNA中,由于细胞质/DNA的遗传与性别相关联,故可避免因花粉传播而造成基因污染(目的基因传播到非转基因生物中)2.动物受精卵:显微注射技术用(如显微注射)技术/方法将目的基因导入cf转基因/基因工程技术2+3.原核细胞:CaCl2/Ca处理法(先用Ca2+处理增加细胞壁通透性,使之成为感受态细胞,再将重组质粒与感受态细胞混合,在一定温度下感受态细胞吸收DNA分子)——原核生物作为受体细胞的原因①繁殖快②体积小新陈代谢旺盛(目的产物合成效率高)③遗传物质少(便于操作)④单细胞(容易培养)第四步:筛选含有目的基因的受体细胞

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