细胞常见污染情况分析
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仅供个人参考细胞培养常见污染的判别及应对措施
2011-01-02 10:19:04| 分类: | 标签:污染 |字号大中小 订阅
一、避免细胞培养污染的措施:
污染是细胞培养中一个大敌,一旦污染,前功尽弃!决定要进行细胞培养,首先一定要有强烈的无菌意识!操作中要遵守严格的操作规程,不要怕麻烦,越细心越好!注意以下几点,大部份的污染是可以避免 的:
1. 每次开始实验前,先用紫外照无菌台和实验室20分,用酒精擦手,台面和不消毒的器械(如移液枪等);实验中,如允许,尽量多过火,开起或盖盖都靠近火焰或在无菌台深处;使用无菌台后,再用酒精擦台面,紫外照20分!
2. 滴管不要接触瓶口,吸取废液及加入新鲜培养基时都要注意不要滴在瓶口上等等。 3. 凡是接触瓶口后都要用酒精灯烧烧。
4. 提取组织时,往往头会距离组织很近,所以带口罩很重要!还要换无菌衣(紫外照过的白大褂)。 5. 注意配制完全培养基时不要发生污染,在使用前一定要做无菌培养,因为一般应用污染后的培养基培养细胞后,很快就会发生特别严重的污染。
6. 操作时一定按照实验室的要求,切忌粗心大意。
7. 使用完的东西尽快移出无菌台!另外无菌台上的器械,试剂摆放,也尽量遵循一定的顺序!依污染可能程度依次向外摆。
二、常见的细胞培养污染:
下面是几种细胞培养过程中常见的污染: 1. 支原体污染:
传说中的黑焦虫,长得暴快。24小时就满视野都是了。污染源大多数情况下是培养用血清。 图1 支原体污染的光镜检测(圆圈所示,×10倍) 图2 支原体污染的光镜检测(×20倍) 图3 支原体污染的荧光检测
图4 支原体污染的电镜检测(×30k,煎蛋状和其他形状) 图5 支原体污染的电镜检测 2. 念珠菌污染:
似乎无处不在,而且顽固得很。长得暴快(12h就能在细胞上面密布)。培养液澄清。低倍显微镜下像黑色的沙子铺在细胞上,高倍镜下呈树枝状或葡萄状。
图6 念珠菌污染的光镜检测(低倍镜) 图7 念珠菌污染的光镜检测(高倍镜)
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图8 念珠菌污染的光镜检测(高倍镜) 图9 念珠菌污染的检测(革兰氏染色阳性)
这么大面积的污染,你可以看看是不是操作上出了问题,要不然就是培养基的问题。既然已经污染了,就全部更换你的器皿。培养箱的水没有必要用无菌水,但最起码要是蒸馏水。
3.霉菌污染
比较常见的一种污染,常常来源于污染的空气、水和器械。 图10 霉菌污染的光镜检测(低倍) 图11 霉菌污染的光镜检测
(典型的霉菌污染,肉眼看到白色的团块或白点,镜下呈丝状。400倍) 图12 霉菌污染的光镜检测(树枝状,高倍) 图13 霉菌污染的倒置显微镜检测(树枝状) 4. 杆菌污染:
培养基中加入抗生素可以减少此种污染,但也不是绝对的。 图14 杆菌污染的光镜检测(瑞氏染色,高倍) 图15 杆菌污染的光镜检测(瑞氏染色,低倍) 细胞中的颗粒到底是怎么回事?
我的细胞总有颗粒,开始是细胞中有,后来细胞之间也好像有许多颗粒。好像是细胞碎片一样。是什么东西啊?是支原体污染吗?这可是我刚买回来的细胞啊! 我们实验室也有这种情况,是不是黑的小碎片,有人说是细胞代谢产物,后来拿到高倍镜下看还会动,就怀疑是污染了,也想问问大家到底是什么
是黑色的小碎片。我没注意到它会动,只是觉得不像是活的微生物。我觉得是由于某种污染或外界因素导致的细胞状态变差,裂解出的东西。但是,是什么东西不清楚。 的确很常见
在以前帖子见到说是“黑焦虫”。长时间培养的很容易出现,我根据自己的经验估计是一种污染,因为随着黑点增多,本来生长旺盛的细胞逐渐停滞甚至死亡。而且我后来原代培养的几批细胞并没有发现,我怀疑有好多细胞系本身就是污染的。不过增加换液次数的情况下,好象一般不太娇气的细胞生长不是很受影响。 以前听很有经验的老师说黑焦虫是国产血清的问题,可以有条件换进口血清试试,或者离心一下也可能能解决问题。那么所谓的“黑焦虫”到底是什么东西啊?有谁知道?
我培养的细胞也出现过此中问题,放到高倍镜下看时有东西在动,但培养液不混浊,估计不是细菌污染,可能是血清问题,是支原体污染。
我培养的细胞也出现过这样的问题,我个人认为是一种支原体污染。国产血清是罪魁祸首,因为只要将细胞饥饿一下,不超过24小时,这种东西就会疯长
我培养的细胞也有出现这中情况。但是并不影响细胞生长。应该不是支原体污染
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最近,我复苏细胞细胞的时候也发现过这样的东西,尽管我用的是GIBCO的FBS,后来,每天换液之前洗几遍后,就慢慢变少,现在没了 细胞培养的细菌污染
我们新建的细胞室。每周都会做清洁,用0。2%新洁尔灭消毒,照紫外。实验前也会照至少30分钟。培养基中加青霉素,链霉素。可是培养细胞时还是常有细菌污染,有时甚至分析不出原因。用培养瓶还好一点,用多孔板或平皿就更凄惨。我养的是哺乳动物细胞,不知各位有什么好的方法避免污染!谢谢! 很可能是超净台无效了,,或者培养基? 其实严格操作箱污染都难
我们是新的超净台,不可能失效。而且用同一瓶培养基,一瓶传两瓶,原始的一瓶污染, 新传的很好。所以我分析不出原因呀 那么假如把原始的那瓶换新瓶养可以么? 都污染了,我仍还来不及,那还敢换新瓶
染菌有很多原因,因为整个细胞操作过程均要求无菌,所以看看操作是否规范,例如戴手套等。 多半是环境因素,做点平板,操作时放在几个地方,培养后看看长菌情况。消毒用新洁尔灭好象不是太有用。
人是最大的污染源,不知你做好手部的消毒工作以及戴口罩没有,其实,只要你操作的好,严格在靠近火的附近操作,污染的几率是很小的。从你的描述中可以看出培养基应该没有问题,新的一瓶很好,老的一瓶污染,只有操作不当引起的,还需要加强练手。 求助!关于细胞培养中的真菌污染!感激!
先谢谢大家的帮助!现在细胞培养基里出现了很多白色和黑色的小点,有好长的时间了!细胞的形态看起来不太好,但是有些细胞也长的很好,如成纤维细胞,但是内皮细胞就差很多!加大量的抗生素没有效果!不知道是不是真菌污染,怎么鉴别!因为培养了很长时间都没有出现真菌的菌丝,所以不能肯定是真菌!那些白色的小圆点有点象白色链球菌或链珠菌,但是不能确定!怎么样才能判断确定,改用什么办法解决!谢谢大家的帮助!
杀灭真菌听说用两性霉素,但从没试过。真菌污染是件很麻烦的事,可能重新复苏细胞是最好的办法。同时该注意如何防止污染。
我觉得如果是真菌污染,培养基会浑浊,是肉眼可见的浑浊。在这种情况下最好赶紧将该瓶细胞扔掉,免得引起培养箱中的大规摸污染。在显微镜下,真菌是成念珠状的,这时细胞界限不清。这可能是不规范操作引起的,安全起见还是将细胞室全面打扫一下,用新洁尔灭擦,紫外照!
谢谢大家的帮助,因为实验室以前从来就没有这样的污染,所以大家也没有经验!现在就是不能确定是不是污染。我不可能把实验室所有的细胞都扔掉,因为有好多人都在一起养不同类型的细胞!现在确实是问题,培养基也没有浑浊,操作的时候已经十二分的小心了!
我想问一下,你看到的那些白色或黑色的圆点是在低倍还是高倍显微镜下?若培养基不混浊,可能真的是细胞状态太差,没有贴壁还缩成球状。难道你们实验室所有细胞都用一瓶培养基?只要将污染的扔掉就行,没必要都扔掉!
两性霉素!sigma在华美有分装!但是浓度很小,关键还是环境问题! 黑白圆点在100倍显微镜下有多大,是不是酵母菌
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小黑点和小白点是在200倍的显微镜下观察所见,大小可能是细胞核的1/5到1/4左右!细胞状态不好是因为跟以前培养的细胞来比较所得,细胞能贴壁,能生长,但是没有以前的那么快,而且形态看的也不好!另外问一下sleevexz,酵母菌是什么样的,怎么鉴别!
还有一个问题就是,实验室用的双抗是从Gibco公司买过来的直接使用的液体,具体规格是100ml一瓶,Pelicillin-Streptomycin 一起,50倍的,要求储存在-20 C,但是有效期只到2002年9月,现在都已经差不多过期半年了,但是实验室的老师都说没有问题,可以用,现在大家就都是一直用这样的抗生素在!你们说会不会是抗生素的问题的!
养细胞经常无缘无辜的染菌?烦烦烦!!!!我是一个新手,但已养细胞近半年,